近日，中国抗癌协会病理专业委员会肺癌学组发布的《ROS1阳性非小细胞肺癌诊断病理专家共识》中对FISH检测ROS1基因重排阳性进行如下规定：ROS1 酪氨酸激酶结构域由基因3’端部分编码，故分离信号形态和含有单一的3’信号形态的细胞都可归为重排阳性细胞，而含有单一5’信号状态的细胞不应被判读为重排阳性细胞。从共识规定中可以得出，ROS1基因重排阳性存在三种情况：①一红一绿一融合信号模式；②一红一绿信号模式；③一绿一融合信号模式。对于前两种信号模式比较好理解，而对于第三种的一绿一融合信号模式则不好理解。共识中仅仅说ROS1 酪氨酸激酶结构域由基因3’端部分编码，所以单一的3’信号形态的细胞都可归为重排阳性细胞，但是并没有解释单一3’绿色信号是如何产生的。笔者近日在研究ROS1基因FISH探针设计方案时，初步了解到ROS1基因重排形成一绿一融合信号模式的原因，要了解其原因首先要从ROS1基因重排背景说起。

背景介绍

c-ros肉瘤致癌因子-受体酪氨酸激酶(ROS proto-oncogene 1 , receptor tyrosine kinase, ROS1) 基因定位于6q22.1，编码一种受体酪氨酸激酶（RTK），与细胞的生长、增殖、分化和生存有关。在NSCLC中ROS1基因主要与CD74、EZR、SLC34A2和GOPC等14种基因发生融合，并持续激活ROS1酪氨酸激酶区及下游信号通路，进而引起肿瘤的发生发展。

信号模式

GOPC基因位于6q22.1区域，与ROS1基因相隔200kb。GOPC基因与ROS1基因融合时，会产生ROS1与GOPC中间区域内的片段缺失，就会在FISH检测中看到一绿一融合的信号模式。

EZR基因位于6q25.3区域，与ROS1基因相隔4Mb。ERZ基因与ROS1基因融合时，会产生染色体内倒位，形成典型的一绿一红一融合信号模式。

当ROS1与其他基因发生重排时，ROS1基因5’端转移至其他染色体区域，形成了典型的一绿一红一融合信号模式。

根据现有探针设计方案，笔者发现不同探针设计方案可能在检测ROS1基因重排时并不能检测出非典型的一绿一融合信号模式。

图1 ROS1基因重排模式

探针设计

不同公司的探针，其设计方案可能有所不同，下面列举市面上主流四家公司ROS1基因断裂探针的设计方案，比较各探针设计的区别。

图2 ROS1断裂探针设计

图2中可以看到，A公司ROS1基因断裂探针设计方案采用绿色染料标记ROS1基因3’端区域（557kb），橘红色染料标记ROS1基因5’端区域（317kb），5’端长度317kb覆盖了GOPC基因。BCD公司ROS1基因断裂探针5’端区域长约200kb，并未覆盖GOPC基因。

比较两种设计方案，A公司橘红色染料标记ROS1基因5’端区域包括ROS1基因和GOPC基因，当发生GOPC-ROS1重排而导致GOPC与ROS1中间区域缺失时，由于该设计会残留100kb左右片段，形成在显微镜下可见的红色信号点，仍然形成一个融合信号，所以该设计方案无法检测ROS1和 GOPC是否发生重排，存在漏检风险。

BCD公司橘红色染料标记ROS1基因5’端区域不包括GOPC基因，当ROS1和 GOPC发生重排，形成GOPC-ROS1融合基因时，引起两个基因中间区域200kb左右红色区域缺失，导致单绿（1G1F）阳性信号，与《ROS1阳性非小细胞肺癌诊断病理专家共识》中ROS1结果判读一致。

从ROS1基因断裂探针设计可以看出，不同厂家的设计方案会有差别，该差别会导致临床漏检，存在较大的风险。当我们在选购不同探针时，需要认真研究探针设计方案，尽量减少临床漏检和错检情况的出现。